土壤硝酸還原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）試劑盒說明書

                                    分光光度法 50管/24樣

正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義

S-NR 催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究 S-NR  的活性

對(duì)合理施肥，降低氮素的損失具有重要意義。

測定原理

S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ  +NADH⁺H  →  NO2ˉ +NAD＋  +H 2 O；產(chǎn)生的亞

＋

硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對(duì)–氨基苯磺酸及  α -  萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的

紅色偶氮化合物在  540 nm  有大吸收峰，可用分光光度法測定。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：液體 10mL×1瓶，-20℃保存。

試劑二：液體 4mL×1瓶，-20℃保存。

試劑三：液體 12.5mL×1瓶，4℃保存（如出現(xiàn)結(jié)晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）。

試劑四：液體 12.5mL×1瓶，4℃保存。

試劑五：標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液 1mL，-20℃保存。

0.1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液的配制：用時(shí)將試劑五稀釋100倍，即取0.1ml 加蒸餾水定容至10ml。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。

測定操作表

混勻，室溫顯色 20min后，4000g，25℃離心10min，用蒸餾水調(diào)零，540nm下讀取各管吸

光值。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測一次。每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-NR活性計(jì)算：

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)S-NR活力單位。

S-NR（μmol /d/g）=C標(biāo)準(zhǔn)×（A測定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×V反總÷W÷T=12×

（A測定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.1μmol/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；T：反應(yīng)時(shí)間，

1h=1/24d； W：樣本質(zhì)量，0.1g。