葡萄糖檢測(cè)試劑盒(Folin-Wu 微板法)檢測(cè)原理是葡萄糖在加熱的堿性環(huán)境中銅離子還原成氧化亞銅沉淀，后者使磷鉬酸還原成鉬藍(lán)，使溶液呈藍(lán)色，顏色深淺與葡萄糖含量成正比，其最高吸收峰為 420nm，利用酶標(biāo)儀測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值，通過(guò)公式可以計(jì)算出樣品的葡萄糖含量，本試劑盒可用于人或動(dòng)物的血清、血漿、腦脊液、細(xì)胞、組織、細(xì)胞培養(yǎng)基等樣本中的葡萄糖含量定量測(cè)定。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、蒸餾水、PBS、生理鹽水

2、離心管、96 孔板

3、水浴鍋

4、酶標(biāo)儀

操作步驟(僅供參考)：

1、樣本處理：

①血清、血漿、腦脊液樣本：從待測(cè)樣本中分離出的血清或血漿不應(yīng)有溶血，一般需要去除蛋白質(zhì)(即為無(wú)蛋白血濾液)后再經(jīng)檢測(cè)。取抗凝血 0.1ml，加入 0.7ml 蒸餾水和 0.1ml 蛋白酸化液，混勻，緩慢加入 0.1ml 蛋白沉淀液，邊加邊搖勻，至出現(xiàn)暗紅色蛋白質(zhì)沉淀，靜置 10min，3000g 離心 5min，取上清液即為無(wú)蛋白血濾液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②組織樣本：準(zhǔn)確稱取適量組織樣本，按質(zhì)量(g)：生理鹽水或 PBS(ml)=1：9 的比例，加入生理鹽水或PBS，冰浴條件下手動(dòng)或機(jī)械勻漿，2500~3000g 離心 10min，取上清待用。

③細(xì)胞樣本：

a、取適量的細(xì)胞(一般推薦>106 以上)，1000g 離心 10min，棄上清，留取沉淀。b、用 PBS 或生理鹽水清洗 1~2 次，1000g 離心 10min，棄上清，留取沉淀。

c、加入 200~300μl 的 PBS 或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞，功率 300W，每次 3~5s，間隔 30s，重復(fù) 3~5 次。亦可手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不可離心；亦可用 1~2% Triton X-100 冰浴 30~60min，制備好的裂解液不可離心。

2、制備 Glu 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（0.55mmol/L）：取 10ul Glu 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液(55mmol/L)，補(bǔ)加蒸餾水或者無(wú)菌水 990ul，充分混勻即可。根據(jù)需用量，臨用前按比例配置，不宜久存。

3、Glu 加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，如果樣品中的 Glu 濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

充分混勻, 置于沸水浴煮沸 8min，取出，在冷水中冷卻，注意不能搖動(dòng)，靜置 10min， 分別加入 750μl 蒸餾水。

4、Glu 測(cè)定：取 200μl 上述溶液，加入 96 孔板中，以空白孔調(diào)零，用酶標(biāo)儀在 420nm 處讀取標(biāo)準(zhǔn)孔和測(cè)定孔的吸光度。

計(jì)算：葡萄糖含量(mmol/L)=(測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×0.55×10

=(測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×5.5 其中 10 為去蛋白樣品的稀釋倍數(shù)

注意事項(xiàng)：

1、 待測(cè)樣本如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定。

2、 上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。

3、 Glu 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液臨用前按比例配置，不宜久存。

4、 如樣品吸光度值偏大，則需再次稀釋后重新檢測(cè)。

5、 樣品中含有蛋白等干擾物質(zhì)時(shí)，須用去蛋白的方法處理后再行檢測(cè)。

6、 煮沸時(shí)不能動(dòng)搖。

有效期： 6 個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。