產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物體內(nèi)的碳素營(yíng)養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀，常以糖含量作為重要指標(biāo)。單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖。可以利用多糖能被酸水解為單糖的特性通過(guò)測(cè)定水解后的單糖含量對(duì)總糖進(jìn)行測(cè)定。

DNS 試劑(Ghose 法)主要成分是苯酚、氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉、亞硫酸氫鈉和 3,5-二硝基水楊酸，可用于測(cè)定植物總糖和還原糖的檢測(cè)，其原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系。在 540nm 處測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系，利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得樣品中的還原糖和總糖的含量。本試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、蒸餾水

2、50ml 離心管

3、離心機(jī)

4、水浴鍋或恒溫箱

5、分光光度計(jì)

6、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液

操作步驟(僅供參考)：

1、還原糖的提?。?/span>

①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

②50℃水浴 30min，并不時(shí)攪拌，以便還原糖*浸出。

③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至 50ml 離心管，4000g 離心 5min。

④留取上清液，向沉淀中加入 20ml 蒸餾水，混勻，再次 4000g 離心 5min。

⑤留取上清液，將 2 次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至 100ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測(cè)液。

2、總糖的水解和提?。?/span>

①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用 12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸 30min，并不時(shí)攪拌。

③取 2 滴滴加于載玻片上，滴加 1 滴顯色液，檢查水解是否*，如已經(jīng)水解*則不顯示藍(lán)色。

④水解完畢后，冷卻至室溫，加入 6M 氫氧化鈉溶液，使溶液 pH 至 7.4 左右，用蒸餾水定容至 100ml，混勻，4000g 離心 5min 或過(guò)濾，獲得上清或?yàn)V液。

⑤取上清或?yàn)V液 10ml，用蒸餾水定容至 100ml，成稀釋 10 倍的總糖水解液(提取液)，取1ml 總糖水解液，測(cè)定其還原糖的含量。

3、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行操作，以 0 號(hào)調(diào)零，檢測(cè) 540nm 處吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4、還原糖測(cè)定：取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液 1ml，分別加入 DNS 試劑 2ml， 其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作，540nm 處測(cè)定各管的吸光度。

計(jì)算：

還原糖的百分含量：

還原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100

總糖的百分含量：

總糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9

式中：

     C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg)

 VT=提取液的體積(ml)

 m=植物樣品的質(zhì)量(mg)

Vs=測(cè)定時(shí)用的樣品體積(ml)

DNS 試劑(Ghose法)注意事項(xiàng)：

1、 該試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降，盡量避光保存。

2、 稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時(shí)，應(yīng)小心操作，避免傷人。

3、 一般市售的濃鹽酸摩爾數(shù)約為 11.6M，應(yīng)稀釋至 6M 后使用。

4、 待測(cè)樣本如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定。

5、 如果樣品還原糖濃度過(guò)高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

6、 總糖計(jì)算公式在測(cè)定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對(duì)總糖含量很少時(shí)使用，×0.9 是為了從測(cè)定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時(shí)所消耗的水量。

有效期： 12 個(gè)月有效。