產(chǎn)品簡介：聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng)，它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠及變性聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)，兩種聚丙烯酰胺凝膠電泳在操作上基本上是相同的，只是非變性聚    丙烯酰胺凝膠的配制和電泳緩沖液中不能含有變性劑如 SDS 等，在電泳的過程中蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)，并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開，主要用于分離某種特定的有生物學活性的成分；SDS-PAGE 使用變性劑 SDS 使蛋白溶解、變性并帶上大量負電荷，每微克蛋白質(zhì)結(jié)合 SDS 的量是一定的，這樣就使每單位質(zhì)量蛋白質(zhì)有一定的電荷密度， 因此可以根據(jù)多肽鏈的分子質(zhì)量進行分離。常規(guī)SDS-PAGE 凝膠電泳適用于分離大分子蛋白，對于小分子量的蛋白或多肽，分辨率大大降低，則需要用 Tris-Tricine 緩沖液系統(tǒng)電泳。

 Tricine-SDS-PAGE 電泳能夠較好的分離 10KD 以下的蛋白或多肽，是電泳法分離多肽的主要方法，Gel Buffer 含有 pH 值為 8.45 的 Tris-HCl 緩沖液和 SDS，30T 一般可以配制 30～35 塊膠，具體配制的量應(yīng)根據(jù)器具大小決定，電泳分離后可直接考馬斯亮藍染色、銀染等。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、配制 10%過硫酸銨(APS)：直接在 0.3g Ammonium Persulfate 中加入 3ml 蒸餾水(1g 每瓶加入 10ml 蒸餾水)，充分溶解，分裝成小份儲存于-20℃或 4℃。

2、按照附表配制分離膠，根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度：

①將不同體積的蒸餾水、49.5%T 6%C、Gel Buffer、Glycerol 加入到離心管中并充分混合。

②加入 10%APS 和 TEMED，立即渦旋混勻 5～10s，以使溶液充分混勻。

③在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1mm mini-gel，分離膠溶液加約 4ml），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層 1～3cm 的水層，使凝膠表面保持平整。

④靜置，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。3、按照附表配制夾層膠：

①去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。

②將不同體積的蒸餾水、49.5%T 3%C 和 Gel Buffer 加入到離心管中混合。

③加入 10%APS 和 TEMED，立即渦旋混勻 5～10s，以使溶液充分混勻。

④將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對于 1mm 的 mini-gel，夾層膠溶液加約1ml)，然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層 1～2cm 的水層，使凝膠表面保持平整。

⑤靜置，待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。    4、按照附表配制濃縮膠：

①去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。

②將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和 Gel Buffer 加入到離心管中混合。

③加入 10%APS 和 TEMED，立即渦旋混勻 5～10s，以使溶液充分混勻。

④將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

⑤靜置，待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，避免破壞加樣孔，進行電泳操作。

5、電泳：將電泳槽置于 4℃或冰水浴中，外槽加入陽極緩沖液，內(nèi)槽加入陰極緩沖液，30V 預電泳 10 min，將處理好的樣品加入點樣孔，30V 電泳 1h，100V 電泳至溴酚藍到達膠底部后停止電泳，進行后續(xù)的考馬斯亮藍染色或電轉(zhuǎn)?？蛇x購  Tris-Tricine 陽極緩沖液(5×,pH8.9)和 Tris-Tricine 陰極緩沖液(5×)。

注意事項：

1、過硫酸銨配制成 10%溶液分裝后-20℃保存，應(yīng)盡量減少室溫存放時間以防失效，取出的 APS 溶液可短期 4℃保存，有效避免失效的方法是分成小份，即一般用 1.5ml EP 管分裝成 0.5～1ml/支，-20℃保存，每支使用 2～3 次即棄用。

2、TEMED 極易揮發(fā)，使用后請蓋緊瓶蓋 4℃保存，另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關(guān)系密切，可通過適當調(diào)節(jié) TEMED 的用量，控制在不同的室內(nèi)環(huán)境下凝膠凝聚的速度。

3、配制聚丙烯凝膠的過程中如果冬天室溫較低情況下，上下層膠出現(xiàn)白色沉淀是正?，F(xiàn)象，    可以置于 37℃水浴鍋溶解后使用；冬天氣溫較低，分離膠凝固較慢，可將膠板置于空調(diào)下加速凝固。

4、在分離膠上層加蒸餾水時要緩慢，速度不宜過快。

5、49.5%T 3%C 和 49.5%T 6%C 為不同比例的 Acr-Bis，有神經(jīng)毒性，請小心操作，長期使用置于 4℃有助于其性能的穩(wěn)定。

6、如需測定大分子蛋白可選購 SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒或SDS-PAGE 凝膠快速配制試劑盒。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6 個月有效；4℃運輸，4℃保存。